Optimization of Immobilized Aldose Reductase Isolated from Bovine Liver

Marya Vakıl Naslıyan, Sidar Bereketoğlu, Özlem Yıldırım

Department of Biology, Faculty of Science, Ankara University

INTRODUCTION: Isolation of enzymes and experiments on enzymes require a great effort and cost and also they are time-consuming. Therefore, it is important to extend the usability of the enzymes by immobilizing. In this study our purpose was to immobilize the aldose reductase (AR) enzyme and to optimize the experimental conditions of the immobilized AR and compare them to the free AR’s.
METHODS: AR was isolated from bovine liver and immobilized the enzyme into the photographic gelatin by cross-linking with glutaraldehyde. Then the optimum conditions of free and immobilized AR for pH, temperature and storage were characterized by determining the enzyme activity.
RESULTS: Following immobilization, the optimum pH and temperature levels of free AR which were pH 7.0 and 60 °C slightly altered to pH 7.5 and 50 °C. The enzyme activity of the immobilized AR maintained for about 65% after reusing 15 times. Moreover, immobilized AR can maintain its original activity for 95% after 20 days storing at 4 °C, while the retained activity of the free AR was 85% of its original activity.
DISCUSSION AND CONCLUSION: Our experiments indicated that the conditions which affect the enzyme activity might alter following immobilization. Once the optimum experimental conditions are fixed, the immobilized AR can be stored and reused with a higher efficiency than the free aldose reductase. Moreover, this study provides an insight into the advantages of using immobilized AR in the enzyme assays rather than the free one.

Keywords:

Sığır Karaciğerinden İzole Edilen İmmobilize Aldoz Redüktazın Optimizasyonu

Marya Vakıl Naslıyan, Sidar Bereketoğlu, Özlem Yıldırım

Ankara Üniversitesi, Fen Fakültesi, Biyoloji Bölümü

GİRİŞ ve AMAÇ: Enzim izolasyonu ve enzimler üzerinde yapılan deneyler, büyük çaba, maliyet ve zaman gerektirir. Bu yüzden, enzimlerin kullanılabilirliğinin immobilizasyon ile uzatılması önemlidir. Bu çalışmadaki amacımız, aldoz redüktaz (AR) enzimini immobilize etmek ve serbest AR’ninkiler ile karşılaştırarak immobilize AR’nin deney şartlarını optimize etmektir.
YÖNTEM ve GEREÇLER: AR, sığır karaciğer ve böbreğinden izole edildi ve gluteraldehid ile fotoğrafik jelatine çapraz bağlanarak immobilize edildi. Daha sonra, enzim aktivitesi belirlenerek serbest ve immobilize AR’nin optimum pH, sıcaklık ve depolama koşulları tespit edildi.
BULGULAR: Serbest AR için pH 7,0 ve 60 °C olan optimum pH ve sıcaklık seviyeleri, immobilizasyondan sonra pH 7,5 ve 50 °C olarak belirlendi. İmmobilize AR’nin enzim aktivitesinin, 15 kez kullanımdan sonra %65 oranında korunduğu tespit edildi. Bununla birlikte, +4°C’de 20 gün boyunca saklanan serbest AR’nin aktivitesi %85 oranında korunurken immobilize AR’nin aktivitesinin %95 oranında korunduğu bulunmuştur.
TARTIŞMA ve SONUÇ: Deneylerimiz, immobilizasyonu takiben enzim aktivitesini etkileyen koşulların değişebileceğini göstermektedir. Ayrıca, immobilize AR, serbest AR’ye göre daha yüksek aktiviteyle korunup tekrar tekrar kullanılabilmektedir.

Anahtar Kelimeler:

Marya Vakıl Naslıyan, Sidar Bereketoğlu, Özlem Yıldırım. Optimization of Immobilized Aldose Reductase Isolated from Bovine Liver. . 2019; 16(2): 0-0

Corresponding Author: Özlem Yıldırım, Türkiye