The Ca2+ mobilisation and the inhibition of akt reduced the binding of PEO-1 cells to fibronectin
Seda Mehtap Sarı Kılıçaslan1, Aysun Ayrım2, Elif Apaydın3, Zerrin İncesu41Anadolu University, Faculty Of Education, Eskişehir,2Eskişehir Osmangazi University, Life Sciences Institute, Eskişehir,
3Anadolu University, Life Sciences Institute, Eskişehir, Turkey
4Anadolu University, Faculty Of Pharmacy, Eskişehir, Turkey
Objectives: The aim of this study is to investigate the effects of intracellular Ca2+ mobilisation, β-catenin and AKT signal pathways after the binding of metastatic ovarian cells to fibronectin.
Materials and methods: The expression levels of α4β1 and αvβ6 integrin were determined using α4, β1, αv and β6 antibodies by flow cytometry on PEO-1 cells. The effect of [Ca+2]i on cell adhesion capacity was investigated by using Real Time Cellular Analysis (RTCA) after stimulated PEO-1 cells by using thapsigargin and tunicamycin. The binding rate of PEO-1 cells to fibronectin was also investigated in the presence of either different concentrations of cardamonin inhibiting accumulation of β-catenin or different concentrations of FPA 124 which is specific inhibitor for PKB/AKT signal pathway by using RTCA.
Results: RTCA analysis results showed that increasing of [Ca+2]I by leaking of calcium store is strongly effective on PEO-1 cell binding to fibronectin. Extracellular calcium influx also reduced the binding of PEO-1 cells. Cell binding to fibronectin was also inhibited with a ratio of 64 % in the presence of 100 µM cardamonin compared to untreated control cells. Finally, it’s found that PKB/AKT inhibition with 15 µM FPA 124 decreased the binding of PEO-1 cells to fibronectin with the ratio of 88% compared to untreated control cells.
Conclusion: This study concludes that PEO-1 cells binding to fibronectin via integrins could be related to intracellular Ca+2 mobilisation and Akt singaling.
Ca2+ mobilizasyonu ve akt inhibisyonu ile PEO-1 hücrelerinin fibronektine bağlanmasında azalma
Seda Mehtap Sarı Kılıçaslan1, Aysun Ayrım2, Elif Apaydın3, Zerrin İncesu41Anadolu Üniversitesi, Eğitim Fakültesi, Eskişehir2Eskişehir Osmangazi Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Eskişehir
3Anadolu Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Eskişehir
4Anadolu Üniversitesi, Eczacılık Fakültesi, Eskişehir, Türkiye
Amaç: Bu çalışmada, metastatik ovaryum kanser hücrelerinin fibronektine bağlanmasından sonra, hücre içi Ca2+ mobilizasyonu, β-katenin ve AKT sinyal yollarının etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır.
Materyaller ve metotlar: α4β1 ve αvβ6 integrinlerin ekspresyon düzeyleri α4, β1, αv ve β6 antikorları kullanılarak akım sitometrisi ile PEO-1 hücrelerinde tespit edilmiştir. [Ca+2]’un hücre adezyon kapasitesine etkisi, PEO-1 hücrelerinin tapsigargin ve tunikamisin ile uyarılmasından sonra Gerçek Zamanlı Hücresel Analizi (RTCA) kullanılarak araştırıldı. PEO-1 hücrelerinin fibronektine bağlanma oranı β-kateninin toplanmasını inhibe eden farklı kardamonin konsantrasyonları varlığında veya PKB/AKT sinyal yolu için spesifik inhibitör olan FPA 124’ün farklı konsantrasyonları için RTCA kullanılarak araştırıldı.
Bulgular: RTCA analiz sonuçları kalsiyum depolarından sızmasıyla artan [Ca+2]’un PEO-1 hücrelerinin fibronektine bağlanmasını güçlü bir şekilde etkilediğini göstermiştir. Hücre dışı kalsiyum akımı PEO-1 hücrelerinin bağlanmasını azaltmıştır. 100 µM kardamonin varlığında muamele edilmemiş kontrol hücrelerine göre hücrenin fibronektine bağlanması %64 oranında inhibe olmuştur. Son olarak, 15 µM FPA 124 ile PKB/AKT inhibisyonu da PEO-1 hücrelerinin fibronektine bağlanmasını %88 oranında düşürdüğü bulunmuştur.
Sonuç: Bu çalışma PEO-1 hücrelerinin integrinler aracılığı ile fibronektine bağlanmasının hücre içi Ca2+ mobilizasyonu ve Akt sinyali ile ilgili olabileceği sonucuna varmıştır.
Corresponding Author: Seda Mehtap Sarı Kılıçaslan, Türkiye
| TOOLS |
 Full Text PDF Print Download citation RIS EndNote BibTex Medlars Procite Reference Manager Share with email Share Send email to author
Similar articles Google Scholar |