Diagnosing Human Papillomavirus and Human Papillomavirus Type 16 By Real-Time PCR in Patient Undergone to Colposcopy and Significance of the Diagnosis

Özdaş, Sibel; BOZDAYI, Gülendam; DEMİRAĞ, Aytül; Onan, Anıl; TAŞKIRAN, ÇAĞATAY; İLHAN, Mustafa N.

Sibel Özdaş¹, Gülendam BOZDAYI¹, Aytül DEMİRAĞ¹, Anıl Onan², ÇAĞATAY TAŞKIRAN², Mustafa N. İLHAN³

¹Department Of Microbiology, Gazi University, Ankara, Turkey
²Department Of Obstetrics And Gynecology, Gazi University, Ankara, Turkey
³Department Of Public Health, Gazi University, Ankara, Turkey

Objective: It is aimed to determine presence of HPV and HPV 16 by Real-Time PCR in cervical smears obtained from patients during colposcopic examination who had referred to outpatient clinic of Gynecology and Obstetrics Department due to various complaints and to examine interrelation between positive test results and clinical data. Method: Sixty patients were included in the study who were referred to outpatient clinic due to vary complaints and who had been decided to undergo to colposcopic examination. DNA was obtained from each smear sample by phenol-chloroform-isoamylalcohol method. L1 region was replicated in amplification process using MY09/MY11 primers. Products for Nested Real time PCR were studied in Ligth Cycler equipment by GP5+/GP6+ primers and Cyanine-5 labeled HPV 16 DNA specific probe. Real time PCR products were undergone melting curve analysis by LigthCycler software version 3.5.3. HPV DNA positivity and HPV 16 positivity were determined at 78-82°C and 68°C, respectively. Results: No statistically significant difference could be detected between HPV positivity, HPV 16 in and types other than HPV 16 control group and patients with positive test result as a consequence of colposcopic examination. Again, no statistically significant difference could be detected between HPV positivity and status of parity, result of PAP test, marital status and age of patient. Conclusion: No statistically significant difference could be detected between HPV positivity, HPV 16 in and types other than HPV 16 control group and patients with positive test result as a consequence of colposcopic examination. Again, no statistically difference could be detected between HPV positivity and result of PAP smear test, marital status, age of patient and smoking but statistically significant difference could be detected between types other than HPV 16 and status of parity (respectively; χ2=0.821, p=0.365; χ2=0.752, p=0.564; χ2=0.364, p=0.834; χ2= 6.835, p=0.033).

Keywords:

Kolposkopi Uygulanan Hastalarda Real- Tıme PCR ile Human Papillomavirus ve Human Papillomavirus Tip 16 Tanısı ve Önemi

Sibel Özdaş¹, Gülendam BOZDAYI¹, Aytül DEMİRAĞ¹, Anıl Onan², ÇAĞATAY TAŞKIRAN², Mustafa N. İLHAN³

¹Gazi Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Abd, Ankara
²Kadın Hastalıkları Ve Doğum Abd, Gazi Üniversitesi Tıp Fakültesi, Ankara
³Halk Sağlığı Ad, Gazi Üniversitesi Tıp Fakültesi, Ankara

Amaç: Kadın Hastalıkları ve Doğum Anabilim Dalı polikliniğe çeşitli nedenlerle başvuran hastaların kolposkopik muayenesi sırasında alınan serviks sürüntü örneklerinde Real-Time PCR ile HPV ve HPV tip 16 varlığını saptanması ve klinik veriler ile pozitiflik arasındaki ilişkiyi irdelemek amaçlanmıştır.
Yöntem: Çalışmaya, disüri, vajinal akıntı, bel ve kasık ağrısı, postkoital kanama şikâyetleriyle polikliniğe başvuran, kolposkopi kararı verilen ve servikal sürüntü örneği alınan 60 hasta dahil edilmiştir. Sürüntü örneklerinden fenol-kloroform-izoamilalkol yöntemi ile DNA elde edilmiştir. Amplifikasyonda MY09/MY11 primerleri kullanılarak L1 bölgesi çoğaltılmıştır. Nested Real-Time PCR için MY09/11 ürünleri GP5+/GP6+ primerleri ve Cyanine-5 labeled HPV 16 DNA specific probe ile Ligth Cycler (Roche Diagnostics, Germany) cihazında çalışılmıştır. Real time PCR ürünlerine, LigthCycler software version 3.5.3 (LC 2.0 Roche Diagnostics, Germany) programı ile melting curve analizi yapılmıştır. Human papillomavirus DNA pozitifliği 78-82°C’de, HPV 16 pozitifliği ise 68°C’de tespit edilmiştir.
Bulgular: Kolposkopik inceleme sonucu pozitif bulgusu olan hastalarda ve kontrol grubunda HPV pozitifliği, HPV tip 16 ve HPV 16 dışındaki tipler arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark tespit edilememiştir (χ2=1.981 p=0.371; χ2=1.524 p=0.467; χ2=3.644 p=0.162). HPV pozitifliği ile PAP smear testi sonucu, medeni durum, yaş ve sigara arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunamamışken, HPV 16 dışındaki tipler ile gebelik sayısı arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark tespit edilmiştir (sırasıyla; χ2=0.821, p=0.365; χ2=0.752, p=0.564; χ2=0.364, p=0.834; χ2= 6.835, p=0.033).
Sonuç: : Çalışmamızda kolposkopik bulgular ile HPV prevalansı arasında istatistikî anlam taşıyan bir ilişki bulunmuştur. Real Time PCR yöntemi ile kolposkopi pozitif bulunan hastaların, belli bir algoritma dâhilinde takiplerinin yapılması ve sonuçlar doğrultusunda hastaların yönlendirilmesinin önemli olduğunu düşünmekteyiz.

Anahtar Kelimeler:

Sibel Özdaş, Gülendam BOZDAYI, Aytül DEMİRAĞ, Anıl Onan, ÇAĞATAY TAŞKIRAN, Mustafa N. İLHAN. Diagnosing Human Papillomavirus and Human Papillomavirus Type 16 By Real-Time PCR in Patient Undergone to Colposcopy and Significance of the Diagnosis. . 2013; 10(2): 79-89

Corresponding Author: Sibel Özdaş, Türkiye